背景
滅螨醌是一種重要的合成殺螨劑農(nóng)藥，用來控制虱類、螨類和其他無脊椎動(dòng)物的殺蟲劑，羥基滅螨醌是其代謝產(chǎn)物，具有高效、低毒、光譜和生物降解性等特性，在國內(nèi)國外廣泛使用。歐盟、日本、加拿大及美國等國家地區(qū)對水果中滅螨醌殘留量都有嚴(yán)格的限量要求，最大殘留量(MRLs)為滅螨醌及其代謝物羥基滅螨醌的混合殘留總量。歐盟規(guī)定了蘋果和梨中為0.1mg/kg，橙子為0.4mg/kg；美國規(guī)定葡萄中為1.6mg/kg；我國的標(biāo)準(zhǔn)SN/T 4066-2014測定低限為0.005mg/kg。
本文參考SN/T 4066-2014《出口食品中滅螨醌和羥基滅螨醌殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》，采用珀金埃爾默的QSight 220三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了食品中滅螨醌和羥基滅螨醌的檢測方法，利用QSight獨(dú)特的雙離子源特色技術(shù)，該款儀器同時(shí)具有ESI和APCI雙離子源的配置，具有各自獨(dú)立的氣路和加熱系統(tǒng)，可見下圖。
無需手動(dòng)更換離子源，只需在軟件中進(jìn)行一鍵切換，即可滿足不同檢測模式的需求，簡單快速。同時(shí)前端配備的超高壓液相色譜，可以高效分離兩種化合物，并且靈敏度高，重復(fù)性好，完全滿足茶葉等食品中滅螨醌和羥基滅螨醌的限度檢測要求。
實(shí)驗(yàn)方法
樣品處理：參考標(biāo)準(zhǔn)SN/T 4066-2014.
試樣準(zhǔn)備：
取茶葉樣品約500g，經(jīng)食品粉碎機(jī)粉碎并通過2.0mm圓孔篩，混勻，裝入潔凈容器內(nèi)密封，于0℃~4℃以下保存，備用。
提取：
準(zhǔn)確稱取2.5g(精確到0.01g)茶葉試樣于50mL離心管中，加入5mL水、0.02mL甲酸后，放置0.5h。加入15mL甲酸-乙腈溶液(0.5%甲酸)，用均質(zhì)器在12000r/min高速勻漿1min，加入2g氯化鈉，旋渦混勻，并于7000r/min離心5min，吸取上層有機(jī)相于25mL容量瓶中。殘?jiān)屑尤?0mL甲酸-乙腈溶液(0.5%甲酸)，重復(fù)提取一次，合并上層有機(jī)相并定容至25mL。轉(zhuǎn)移5mL有機(jī)相至試管中，在40℃條件下，氮吹濃縮至近干，待凈化。
凈化：
以2mL弗羅里硅土柱洗脫液【100mL正己烷-丙酮(體積比80+20)中加入0.5mL甲酸】分兩次洗滌以上試管中殘留物并全部轉(zhuǎn)入活化后的弗羅里硅土固相萃取柱中，用刻度試管收集，控制速度不超過1滴/s。待溶液全部流出后，加入10mL洗脫液洗脫，收集全部洗脫液，于40℃氮吹至近干。用乙腈溶解并定容至1mL，過0.22µm的有機(jī)濾膜后上機(jī)測定。
LC-MS/MS儀器方法
珀金埃爾默LX50 UHPLC參數(shù)
色譜柱：
Quasar C18，100*2.1mm，3um，貨號：N9308812；
流動(dòng)相：
A：50%甲醇水(含0.5%甲酸)
B：乙腈(含0.5%甲酸)
柱溫：
40℃
流速：
0.5mL/min
進(jìn)樣量：
10µL
表1.液相色譜梯度洗脫表
質(zhì)譜參數(shù)
采用珀金埃爾默QSight 220三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)進(jìn)行分析，離子源參數(shù)及目標(biāo)化合物質(zhì)譜參數(shù)見表2和表3。
表2.質(zhì)譜離子源參數(shù)
表3.化合物的質(zhì)譜參數(shù)列表
結(jié)果與討論
該方法一針進(jìn)樣，快速測定滅螨醌和羥基滅螨醌兩種物質(zhì)，可實(shí)現(xiàn)較好的分離及出色的峰形和靈敏度，MRM疊加譜圖如下圖2。兩化合物的峰型較好，并具有良好的靈敏度，每個(gè)色譜峰上有足夠的采集點(diǎn)數(shù)，可獲得準(zhǔn)確的結(jié)果及優(yōu)異的重復(fù)性。
圖2.滅螨醌和羥基滅螨醌的MRM提取離子譜圖(5ng/ml)(點(diǎn)擊查看大圖)
采用流動(dòng)相B稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別稀釋成濃度為1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)待測化合物定量離子對峰面積的響應(yīng)和對應(yīng)的濃度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下圖3，在1ng/mL-100ng/mL的濃度范圍內(nèi)，兩個(gè)化合物的線性均非常好，線性相關(guān)系數(shù)R2均在0.999以上。
圖3.滅螨醌和羥基滅螨醌的標(biāo)準(zhǔn)曲線譜圖(點(diǎn)擊查看大圖)
根據(jù)滅螨醌的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對比了稀釋溶劑為乙腈和含0.5%甲酸的乙腈溶液時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)品響應(yīng)情況譜圖及峰面積結(jié)果，見下圖4和表4，故采用兩種稀釋劑均可，無需加入甲酸。
圖4.不同稀釋劑的色譜圖情況(100ng/mL)(點(diǎn)擊查看大圖)
表4.不同稀釋劑下的峰面積結(jié)果
同時(shí)考察了該方法的儀器檢出限情況，在0.5ng/mL的濃度下，羥基滅螨醌和滅螨醌的的信噪比分別為11和12，如下圖所示，可見該方法靈敏度較高，完全滿足該標(biāo)準(zhǔn)的檢出要求。
圖5.0.5ng/mL濃度下的滅螨醌和羥基滅螨醌提取離子譜圖及信噪比結(jié)果(點(diǎn)擊查看大圖)
結(jié)論
01 本文采用LX50 UPLC-QSight 220三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了快速、高靈敏度且可靠的LC-MS/MS實(shí)驗(yàn)方法來測定食品中滅螨醌和羥基滅螨醌兩種化合物，為食品中該類化合物提供了可靠的高通量檢測手段，且檢出限完全滿足相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的要求。
02 同時(shí)，珀金埃爾默的QSight 220液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)具有創(chuàng)新的獨(dú)家雙離子源設(shè)計(jì)和獨(dú)特的主動(dòng)排廢氣設(shè)計(jì)、專利的HSID質(zhì)譜接口以及反吹氣設(shè)計(jì)，儀器自身能夠確保處于潔凈狀態(tài)，具有強(qiáng)大的抗污染能力，從而獲得高靈敏度，重現(xiàn)性好的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，尤其適合該類前處理簡單，無凈化過程的樣品分析，保證靈敏度的同時(shí)，無需日常維護(hù)，大大降低使用成本，同時(shí)無需手動(dòng)頻繁更換離子源，提高效率的同時(shí)減少對實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員的要求。
參考文獻(xiàn)
[1]. SN/T 4066-2014出口食品中滅螨醌和羥基滅螨醌殘留量的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
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