Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅(紅色)是用于標記和檢測活細胞細胞功能的熒光探針之一。Calcein Red, AM自身無熒光,具有細胞膜滲透性。
一旦進入細胞后,被細胞內(nèi)酯酶水解為鈣黃綠素紅(Calcein Red),能與胞內(nèi)鈣離子結(jié)合,產(chǎn)生強烈的紅色熒光(Ex/Em=560/574),用標準的TRITC/Cy3濾片設(shè)置檢測。
試劑簡介
Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅(紅色)是用于標記和檢測活細胞細胞功能的熒光探針之一。Calcein Red, AM自身無熒光,具有細胞膜滲透性。
一旦進入細胞后,被細胞內(nèi)酯酶水解為鈣黃綠素紅(Calcein Red),能與胞內(nèi)鈣離子結(jié)合,產(chǎn)生強烈的紅色熒光(Ex/Em=560/574),用標準的TRITC/Cy3濾片設(shè)置檢測。
Calcein Red AM對濕度敏感,粉末保存要保持干燥。Calcein Red AM儲存液需要分裝避光凍存,且須緊緊密封蓋子,干燥保存。Calcein Red AM工作液須現(xiàn)配現(xiàn)用。
同義名:Calcein Red Acetoxymethyl ester鈣黃綠素紅乙酰甲酯;
Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅染色步驟
大多數(shù)實驗中Calcein Red AM的工作濃度為2-5μM。
由于不同細胞系的染色條件不同,初次實驗建議做梯度實驗,以確定Calcein Red AM的工作濃度,使用低探針濃度得到的熒光結(jié)果為篩選原則。
(1)取一管適量分裝的儲存液(1000×)置于室溫,至少回溫20min,低速離心后,用合適的緩沖液如PBS,HBSS-HEPES稀釋到1×染色工作液。
(2)對于貼壁細胞,先消化細胞,離心收集細胞(1000 rpm,3min)。對于懸浮細胞,直接離心收集細胞。
(3)去上清,用緩沖液清洗細胞2~3次,充分去除殘留的酯酶活性。
(4)用1/10細胞培養(yǎng)基體積的Calcein Red AM染色工作液重懸細胞,37℃孵育20min~1h。
(5)用PBS(或者其他緩沖液)洗滌細胞兩次去除多余染料。
(6)用含合適濾光片(Ex/Em= 560nm/574nm)的儀器進行檢測。
相關(guān)試劑
Alexa Fluor 405-Streptavidin
Alexa Fluor 488-Streptavidin
Alexa Fluor 555-Streptavidin
Alexa Fluor594-Streptavidin
TPEN,Heavy Metal Chelator重金屬螯合劑
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Human Dil-Oxidized Low Density Lipoprotein