試劑名稱：Fluo-3 Pentapotassium Salt Fluo-3五鉀鹽
Fluo-3 Pentapotassium Salt，熒光鈣離子指示劑Fluo-3五鉀鹽，可應用于生物醫(yī)學研究。
化學結(jié)構(gòu)：基于熒光素骨架，修飾BAPTA以增強Ca2+親和力 。
用途：用于檢測細胞內(nèi)游離Ca2+濃度，實現(xiàn)鈣動力學的實時監(jiān)測。適用于流式細胞術、熒光顯微鏡等技術
熒光鈣離子指示劑Fluo-3五鉀鹽的核心作用機制是 "熒光強度隨Ca2+濃度增強" ，具體過程如下：
無鈣狀態(tài)：游離的Fluo-3幾乎無熒光（量子產(chǎn)率極低），因發(fā)色團受BAPTA基團的電子轉(zhuǎn)移抑制而淬滅。
鈣結(jié)合狀態(tài)：當結(jié)合Ca2+后，BAPTA的羧基與Ca2+螯合，分子構(gòu)象變化解除發(fā)色團淬滅，熒光強度增強60-100倍（增強80倍）。
動態(tài)響應：熒光強度變化（ΔF）與Ca濃度呈正比，其中解離常數(shù)為 390–450 nM，適用于胞質(zhì)鈣濃度（~100 nM至μM級）檢測。
關鍵優(yōu)勢：單波長激發(fā)/發(fā)射設計兼容流式細胞儀、共聚焦顯微鏡等設備，無需比率測量即可快速動態(tài)監(jiān)測。
二、實驗操作指南
細胞加載: 因膜滲透性差，需通過微注射、膜片鉗電極導入或劃痕標記法加載 。
母液：高純度無水 DMSO 配制 2–5 mM 儲備液 。
減少探針泄漏: 添加有機陰離子轉(zhuǎn)運體抑制劑：
孵育: 工作液與細胞在室溫孵育 20–120 分鐘，再置換緩沖液移除多余探針 。
激發(fā)波長 506 nm，發(fā)射波長 526 nm 。
重金屬干擾: BAPTA 結(jié)構(gòu)易結(jié)合 Zn2+/Mn2+等，建議添加重金屬螯合劑 TPEN 。
探針流出: 細胞類型差異導致保留時間不同，需在加載后 1–2 小時內(nèi)完成實驗 。
iFluor 700 amine iFluor 700 胺
iFluor 488 hydrazide iFluor 488酰肼
iFluor 647 azide iFluor 647疊氮化物
iFluor 750 hydrazide iFluor 750酰肼
ReadiLink mFluor 620抗體標記試劑盒
ReadiLink mFluor 540抗體標記試劑盒
iFluor 720 maleimide iFluor 720馬來酰亞胺
iFluor 680 succinimidyl ester iFluor 680琥珀酰亞胺酯
iFluor 430 succinimidyl ester iFluor 430琥珀酰亞胺酯
