【??參數(shù)信息】
英文名稱：Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
中文名稱：Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
檢測(cè)設(shè)備：流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡。
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
Annexin V-APC/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是一款用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的試劑盒，可以用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。
本試劑盒包含APC標(biāo)記的Annexin V，用來(lái)檢測(cè)早期細(xì)胞凋亡；以及7-AAD，用來(lái)檢測(cè)壞死細(xì)胞。
Phosphotidylserine，PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂。在正常細(xì)胞中，PS位于細(xì)胞膜內(nèi)面，但當(dāng)?shù)蛲鲩_(kāi)始后，PS在磷脂雙分子層中的不對(duì)稱分布逐漸消失并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜表面，從而暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。
膜聯(lián)蛋白V（Annexin V）是一種分子量約35kDa的鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能輕易結(jié)合PS，并具有高度的親和性。
因此，通過(guò)Annexin V與PS的結(jié)合與否來(lái)判斷凋亡發(fā)生。
另外，7-AAD的引入能輔助區(qū)分凋亡早期細(xì)胞和晚期凋亡或壞死細(xì)胞。
7-AAD作為一種活細(xì)胞排斥探針，不能穿透具有完整細(xì)胞膜的正常細(xì)胞或凋亡早期細(xì)胞，但能穿透喪失細(xì)胞膜完整性的凋亡晚期細(xì)胞或壞死細(xì)胞，從而將細(xì)胞核染紅。
因此，將Annexin V-APC與7-AAD聯(lián)合使用時(shí)，呈現(xiàn)結(jié)果為：正常細(xì)胞（Annexin V-APC-/7-AAD-），早期凋亡細(xì)胞；晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時(shí)呈現(xiàn)雙陽(yáng)性。
【常見(jiàn)問(wèn)題解答】
1） Q：Annexin V/7-AAD凋亡試劑盒能夠用于檢測(cè)人或其他動(dòng)物的細(xì)胞凋亡情況？
A：可以，因Annexin V特異性結(jié)合PS，而PS在不同種屬間無(wú)差異。
2） Q：貼壁細(xì)胞做凋亡用yi酶消化對(duì)細(xì)胞膜有損傷？
A：低濃度yi酶消化，輕柔吹打貼壁細(xì)胞2～3次，4℃，1000rpm離心5min， 處理得當(dāng)?shù)脑挘?yi酶造成損傷可以控制在 5%以內(nèi)，在有對(duì)照組的情況下對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不會(huì)造成明顯影響。
也可以使用非常溫和的Accutase消化酶，能較大程度的保護(hù)細(xì)胞膜完整性。
3） Q：貼壁細(xì)胞可先染7-AAD然后再消化嗎？這樣是否可減少由于消化液造成的細(xì)胞膜損傷而染上7-AAD的誤差？
A：先加 7-AAD不僅染色是否每組都均勻充分很難判斷， 而且7-AAD本身對(duì)細(xì)胞也是有毒性的， 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響會(huì)比yi酶大，不建議這樣做。
4） Q：為什么只能用不含 EDTA的yi酶消化貼壁細(xì)胞，用含 EDTA的yi酶消化細(xì)胞對(duì)結(jié)果有什么影響？
A：因Annexin V是鈣離子依賴性的磷脂結(jié)合蛋白，EDTA是一種金屬螯合劑。因此EDTA的加入會(huì)影響Annexin V活性，進(jìn)而影響結(jié)果。
5） Q：Annexin V-APC/7-AAD凋亡試劑盒是否適合熒光顯微鏡檢測(cè)？
A：本試劑盒經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)能得到理想的染色結(jié)果。對(duì)于熒光顯微鏡未經(jīng)內(nèi)部檢測(cè)，理論上若熒光顯微鏡配有適當(dāng)?shù)臑V片是可行的。
【相關(guān)試劑】
Trypsin (0.25%),Phenol Red
Trypsin-EDTA(0.25%),Phenol Red
AccutaseTM Cell Detachment Solution
Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。
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