【??參數(shù)信息】
英文名稱:Interferon alpha 2/IFNA2 Protein, Human, Recombinant
其他名稱:Human Recombinant干擾素alpha 2
分子量:重組人IFNA2A由165個(gè)氨基酸組成,分子量為19.3kDa。
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
Human Recombinant干擾素alpha 2基本特征
大腸桿菌表達(dá)時(shí)因含His標(biāo)簽增至21.6–23.1 kDa。
氨基酸組成:全長(zhǎng)165個(gè)氨基酸(C24-E188)。
結(jié)構(gòu)域:含胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜螺旋及胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域,通過(guò)α螺旋折疊形成三維結(jié)構(gòu)。
表達(dá)宿主:酵母、大腸桿菌或HEK293細(xì)胞。
標(biāo)簽:部分含His標(biāo)簽(原核表達(dá)),部分無(wú)標(biāo)簽(真核表達(dá))。
主要亞型包括α-2a、α-2b、α-2c:α-2b為主要等位基因,α-2a次之,α-2c為罕見變異。
人類IFN-α家族有至少13種亞型,IFNA2為較早被克隆和應(yīng)用的亞型。
【使用方法】
重組蛋白的復(fù)溶與保存(適用于凍干粉產(chǎn)品)
使用無(wú)菌、無(wú)內(nèi)毒素的溶劑,復(fù)溶濃度為 0.1–1.0 mg/mL。避免渦旋震蕩,輕柔移液混勻。
復(fù)溶后分裝:立即使用或分裝為小份,避免反復(fù)凍融。長(zhǎng)期保存需添加載體蛋白以穩(wěn)定活性。
凍干粉:-20°C 至 -80°C 保存,有效期 12個(gè)月 。
長(zhǎng)期:-20°C 以下保存 3個(gè)月。
穩(wěn)定性驗(yàn)證:37°C 加速降解實(shí)驗(yàn)表明,48小時(shí)內(nèi)活性損失<5% 。
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中的關(guān)鍵步驟
試劑盒操作(以人IFN-α2b ELISA試劑盒為例):
標(biāo)準(zhǔn)品制備:凍干標(biāo)準(zhǔn)品用1.0 mL稀釋液復(fù)溶,靜置10分鐘混勻,按需梯度稀釋。復(fù)溶后標(biāo)準(zhǔn)品不可重復(fù)使用。
生物su化抗體工作液:臨用前30分鐘,按1:100比例用抗體稀釋液配制。
檢測(cè)流程:嚴(yán)格遵循雙抗體夾心ELISA步驟(預(yù)包被抗體→加樣→生物su化抗體→顯色),洗滌液需按1:25稀釋濃縮液 。
(2) 細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)(抗病毒/信號(hào)通路研究)
IFNA2通過(guò)JAK-STAT通路發(fā)揮作用,可通過(guò)檢測(cè)STAT1/STAT3磷酸化水平驗(yàn)證活性(如HCT116細(xì)胞模型)。
抗病毒活性:EC50范圍 0.6–4.2 pg/mL。
操作時(shí)穿戴實(shí)驗(yàn)服及手套,避免污染。
實(shí)驗(yàn)前平衡試劑至室溫(20分鐘),確保反應(yīng)體系一致性。
【相關(guān)試劑】
Rosetta (DE3)Competent Cell
Pan-caspase Inhibitor Z-VAD-FMK
Z-YVAD-FMK (Caspase-1 inhibitor)
Z-DEVD-FMK (Caspase-3 inhibitor)
Ac-DEVD-CHO (Caspase-3/7 inhibitor)
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Ar 1193 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
ATCC15834 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
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