【??參數(shù)信息】
英文名稱(chēng):HT115(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
中文名稱(chēng):HT115(DE3)大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格:10×100μl ,50×100μl
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
HT115(DE3)菌株是一種RNAi飼養(yǎng)菌株,具四環(huán)素抗性,能在37℃,LB培養(yǎng)基上進(jìn)行有氧生長(zhǎng)。主要用于線蟲(chóng)的干擾實(shí)驗(yàn)。
HT115(DE3)菌株是一種特殊的RNase III缺陷型大腸桿菌菌株,此菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體。
除了用于線蟲(chóng)RNAi干擾實(shí)驗(yàn),也適用于靶基因克隆進(jìn)入T7啟動(dòng)子表達(dá)載體比如pET系列的蛋白表達(dá)。
HT115(DE3)大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是大腸桿菌HT115(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。
經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×107 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
【蛋白誘導(dǎo)步驟(僅作參考)】
1)從新鮮涂布平板上挑取一單克隆,轉(zhuǎn)移到含相應(yīng)抗生素的5ml LB液體培養(yǎng)基內(nèi)。
2)37℃,200rpm搖菌培養(yǎng)過(guò)液。
3)將步驟2)中過(guò)夜培養(yǎng)的菌液吸取0.5ml接種到含相應(yīng)抗生素的50ml LB液體培養(yǎng)基內(nèi)(建議使用500ml三角瓶培養(yǎng))。
4)37℃,150rpm搖菌培養(yǎng)直至OD600達(dá)到0.6~0.8(建議0.6,約2.5h)。
5)【可選】用移液槍吸取1ml培養(yǎng)物到干凈的離心管內(nèi),置于冰上直至用于凝膠分析或保存在-20℃。這是非誘導(dǎo)的對(duì)照樣本。
5)加入IPTG使其終濃度為1mM。目的蛋白的誘導(dǎo)時(shí)間可能在2~16h,依蛋白而異。
6)37℃,120rpm培養(yǎng)2~4h。為了確定目的蛋白的誘導(dǎo)時(shí)間,建議作一個(gè)時(shí)間周期優(yōu)化實(shí)驗(yàn),范圍從2~16h。
7)將培養(yǎng)物冰浴10min。4℃,5,000 x g離心10min收集菌株。
8)吸掉上清,將沉淀保存在-20℃(也能保存在較低的溫度)。
【相關(guān)試劑】
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