【??參數(shù)信息】
英文名稱:C58C1 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉感受態(tài)細胞
中文名稱:C58C1農(nóng)桿菌電轉感受態(tài)細胞
【簡單概述】
C58C1 是一種發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogenes)菌株,基因型為C58 染色體背景,并攜帶pRiA4b 農(nóng)桿堿型 Ri 質粒。
該菌株具有strR和rifR雙抗性,對羧芐青霉su等敏感 。
C58C1農(nóng)桿菌電轉感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,適合大質粒的轉化。
基因型為Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR) pRiA4b (agropine type),經(jīng)pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
【操作步驟】
從75%乙醇中取出電擊杯,倒置瀝干5分鐘 → 正置5分鐘使乙醇揮發(fā) → 插入碎冰預冷5分鐘(壓實冰面,杯頂離冰面0.5cm)
(二)感受態(tài)細胞與質?;旌?/span>
取-80℃保存的感受態(tài)細胞,冰浴5分鐘至融化
加入 0.01~1 μg質粒DNA(體積≤6μl,不超過細胞體積的1/10)
輕柔混勻:手指輕彈管底或槍頭吹打(避免渦旋或劇烈震蕩)
啟動電轉儀,電擊后 迅速將電擊杯放回冰中 冷卻1分鐘
向電擊杯中加入700 μl無抗生素LB培養(yǎng)基 → 吸回混合液至原EP管
28℃、150-200 rpm振蕩培養(yǎng) 2-3小時。
6000 rpm離心1分鐘 → 棄上清,保留約100 μl液體。
【相關試劑】
Allophycocyanin (APC) 別藻藍蛋白
Trans-Zeatin Riboside 反玉米素核苷
Picro Sirius Red Stain 天狼星紅染色液
BJ5183-AD-1 Electrocompetent cell
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit