【??參數(shù)信息】
英文名稱:DyLight 594 labeled Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin (LEL, TL)
糖特異性:[GlcNAc]1-3, N-Acetylglucosamine
【簡單概述】
DyLight 594標記的番茄凝集素是一種熒光標記的糖蛋白探針,由番茄(Lycopersicon esculentum)中提取的凝集素(LEL/TL)與紅色熒光染料DyLight 594共價結合形成。
凝集素本身為穩(wěn)定的單亞基糖蛋白,含約50%阿拉伯糖和半乳糖,分子量約71 kDa,可能在溶液中形成多聚體。
DyLight 594是一種光穩(wěn)定性強、發(fā)射亮紅色熒光的熒光染料,標記后幾乎不含游離染料。
特異性識別 N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc) ,比如β-1,3-連接的GlcNAc寡聚體,無血型特異性。
其結合可被殼多糖水解物抑制,表明結合依賴糖鏈結構。
標記:在膠質肉瘤等腫瘤模型中,LEL 的血管標記效果優(yōu)于傳統(tǒng)標記物(如 EHS 層粘連蛋白、PECAM-1),且重復性好 。
適用于 活體注射(劑量和注射時間需優(yōu)化)。
可與 生物su化版本 聯(lián)用,通過鏈霉親和素-過氧化物酶復合物顯色 。
快速清除:血液循環(huán)中半衰期短,利于快速成像。
【常見問題與解決方法】
問題原因:濃度過低、儲存不當導致試劑失效,或激發(fā)/發(fā)射波長設置錯誤。
解決方案:使用推薦濃度范圍(5-20 μg/ml),并確保儲存于2-8°C以維持穩(wěn)定性;驗證熒光顯微鏡設置(激發(fā)592 nm,發(fā)射617 nm)。
問題原因:未偶聯(lián)熒光素殘留、非特異性糖結合,或洗滌不充分。
解決方案:選用高質量產(chǎn)品,并添加抑制糖如Chitin Hydrolysate減少非特異性結合;實驗后加強洗滌。
解決方案:嚴格儲存于2-8°C,避免與水接觸;使用前檢查溶液狀態(tài),如有沉淀應更換新批次。
解決方案:優(yōu)化抗原修復條件,并根據(jù)組織類型調(diào)整修復參數(shù);確保切片水化。
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