標(biāo)題：NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
【??參數(shù)信息】
英文名稱(chēng)：NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell
中文名稱(chēng)：NovaBlue(DE3)大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
生產(chǎn)廠(chǎng)商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
NovaBlue(DE3)菌株來(lái)源于K12菌株，具有較高的轉(zhuǎn)化效率，能同時(shí)用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建以及蛋白的原核表達(dá)。
NovaBlue(DE3)菌株具四環(huán)素抗性，recA和endA的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純質(zhì)粒DNA的提取。
lacZΔM15的存在使其能用于藍(lán)白斑篩選。
NovaBlue(DE3)菌株含DE3區(qū)，說(shuō)明其染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體，適用于靶基因克隆進(jìn)入T7啟動(dòng)子表達(dá)載體比如pET系列的蛋白表達(dá)。
NovaBlue(DE3)大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是大腸桿菌NovaBlue(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。
經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×109 cfu/μg DNA。
且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
【作用機(jī)制】
1. DNA轉(zhuǎn)化機(jī)制（化學(xué)感受態(tài)）
原理：通過(guò)化學(xué)試劑處理細(xì)胞，使其細(xì)胞膜通透性增加，允許外源DNA進(jìn)入。
冰浴融化感受態(tài)細(xì)胞，加入目標(biāo)DNA（體積≤1/10細(xì)胞懸液）。
冰浴30分鐘：促進(jìn)DNA吸附于細(xì)胞表面。
42℃熱激45-90秒：短暫升溫形成膜通道，使DNA進(jìn)入細(xì)胞。
加入復(fù)蘇培養(yǎng)基（如LB/SOC） ：37℃振蕩培養(yǎng)45-60分鐘，使抗性基因表達(dá)。
2. 蛋白表達(dá)機(jī)制（依賴(lài)DE3區(qū)）
DE3區(qū)整合的 lacUV5 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng) T7 RNA聚合酶組成型表達(dá)。
當(dāng)目標(biāo)基因克隆至 T7啟動(dòng)子載體（如pET、pGEX、pMAL系列）時(shí)，T7 RNA聚合酶可特異性激活其轉(zhuǎn)錄。
添加 IPTG（0.1-2 mM）解除 lacIq 阻遏蛋白對(duì) lacUV5 的抑制，誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶及目標(biāo)蛋白表達(dá)。
需優(yōu)化IPTG濃度、溫度（通常37℃）和時(shí)間（通常3-6小時(shí)）。
lacZΔM15 突變導(dǎo)致β-半乳糖苷酶失活，但與載體（如pUC系列）的α肽互補(bǔ)后可恢復(fù)活性。
在含 X-gal 和 IPTG 的平板上，含空載體的菌落呈藍(lán)色，重組質(zhì)粒（插入片段破壞α肽）菌落呈白色。
抗生素篩選：四環(huán)素抗性用于轉(zhuǎn)化子初篩。
【應(yīng)用領(lǐng)域】
高轉(zhuǎn)化效率適合連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化、質(zhì)粒擴(kuò)增及文庫(kù)構(gòu)建。
支持藍(lán)白斑篩選（需使用含lacZα的載體，如pUC系列）。
核心應(yīng)用：專(zhuān)為T(mén)7啟動(dòng)子載體設(shè)計(jì)（如pET、pGEX、pMAL系列），可誘導(dǎo)表達(dá)目標(biāo)蛋白。
需配合IPTG誘導(dǎo)（濃度0.1–2 mM），并優(yōu)化溫度/時(shí)間參數(shù)。
適用于需要高純度質(zhì)粒的實(shí)驗(yàn)（如測(cè)序、轉(zhuǎn)染）。
【相關(guān)試劑】
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