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上海博麥德生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)基,生物培養(yǎng)基 |
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上海博麥德生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)基,生物培養(yǎng)基 |
2012-9-28
| 提 供 商 | 上海博麥德生物技術(shù)有限公司 | 資料大小 | 54.4KB |
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| 資料圖片 | 【點擊查看】 | 下載次數(shù) | 181次 |
| 資料類型 | JPG 圖片 |
細(xì) 胞 融 合
【實驗?zāi)康摹?/span>
掌握細(xì)胞融合原理、應(yīng)用 PEG 融合細(xì)胞的方法以及細(xì)胞融合率的計算。
【實驗用品】
一、材料 雞紅細(xì)胞
二、器材和儀器：顯微鏡、離心機、水浴箱、刻度離心管、試管、載玻璃片、蓋玻片
三、試劑 50％PEG（MW4,000）、Hanks 液（pH7.4）
【實驗內(nèi)容】
一、原理
細(xì)胞融合（Cell fusion），即在自然條件下或用人工方法（生物的、物理的、化學(xué)的）使
兩個或兩個以上的細(xì)胞合并形成一個細(xì)胞的過程。人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合，在六十年代作為
一門新興技術(shù)而發(fā)展起來。由于它不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，
因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個領(lǐng)域。
細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺病毒（Sendai virus），聚乙二
醇（Polyethyleneglycol，PEG）和電脈沖。目前應(yīng)用zui廣泛的是聚乙二醇，因為它易得、簡
便，且融合效果穩(wěn)定。PEG 的促融機制尚不*清楚，它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極
性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。
二、方法
（1）取新鮮雞血以 0.85％生理鹽水制成 10％的懸液。
（2）稱取 0.5 克 PEG（MW=4,000）放入試管內(nèi)，在酒精燈上融化之，迅速加入 0.5ml 預(yù)熱
的 Hanks 液混勻制成 50％的 PEG 溶液。放入 37℃水浴中待用。
（3）取上述 10％的雞紅細(xì)胞懸液 1ml 放入離心管中，再加入 5ml Hanks 液混勻，然后
以 1,000rpm 離心 5 分鐘，小心棄去上清，用指彈法將細(xì)胞團(tuán)塊彈散。
（4）取上述 50％PEG 溶液 0.5ml，在 1 分鐘內(nèi)滴加到雞紅細(xì)胞懸液，邊加邊輕輕搖動混
勻。待 PEG 全部加入后靜置 1 分鐘左右。此全部過程都要求在 37℃水浴內(nèi)進(jìn)行。
（5）緩慢滴加 9ml Hanks 液以終止 PEG 的作用，在 37℃水浴內(nèi)靜置 5 分鐘。
（6）離心棄上清后，取一滴融合后的細(xì)胞懸液滴片，加蓋片鏡檢。
三、結(jié)果觀察
在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個異核體細(xì)
胞。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞。
四、融合率的計算
