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蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法代測(cè)詳解-齊一生物

來源:齊一生物科技(上海)有限公司   2020年09月01日 13:04  

氨基酸是含有氨基和羧基的一類有機(jī)化合物的通稱。生物功能大分子蛋白質(zhì)的基本組成單位,是構(gòu)成動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)。是含有堿性氨基和酸性羧基的有機(jī)化合物。氨基連在α-碳上的為α-氨基酸。組成蛋白質(zhì)的氨基酸均為α-氨基酸。
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法測(cè)定原理:
大多數(shù)蛋氨酸(甲硫氨酸)本身不能發(fā)射熒光,又不具有紫外吸收的特性,需要制成某初中形式的衍生物后才能檢測(cè)。本說明書中運(yùn)用蛋氨酸(甲硫氨酸)與 PITC 柱前衍生,紫外檢測(cè)器 254nm 波長(zhǎng)下檢測(cè) 。
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法 試劑的組成和配制: 
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作:
蛋氨酸(甲硫氨酸)的提?。?br />(1)游離蛋氨酸(甲硫氨酸)的提?。?br />(2)結(jié)合態(tài)蛋氨酸(甲硫氨酸)提?。?br />蛋氨酸(甲硫氨酸)的衍生:
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量測(cè)定操作步驟:
1、 開啟電腦、檢測(cè)器和泵,安裝上色譜柱,打開軟件,在方法組中設(shè)置進(jìn)樣量,設(shè)置完畢保存方法組。
2、 用流動(dòng)相過柱子,待基線穩(wěn)定后開始加樣。
3、 加入標(biāo)準(zhǔn)品,分離蛋氨酸(甲硫氨酸),(柱子不同,保留時(shí)間有差異)。
4、 加入樣品 ,在相應(yīng)保留時(shí)間處檢測(cè)蛋氨酸(甲硫氨酸)的峰面積。
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法含量的計(jì)算:
樣本溶液中各種蛋氨酸(甲硫氨酸)濃度(ug/mL)=f1/f2*C F1=樣本溶液中個(gè)蛋氨酸(甲硫氨酸)峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積
F2=混合蛋氨酸(甲硫氨酸)標(biāo)準(zhǔn)品溶液中各蛋氨酸(甲硫氨酸)峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積  C=混合蛋氨酸(甲硫氨酸)標(biāo)準(zhǔn)品中個(gè)蛋氨酸(甲硫氨酸)濃度
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法注意事項(xiàng):
1、 為了避免使用過程中柱壓變化過大,流速由小到大調(diào)節(jié)。
2、 使用完畢后,需用純乙腈沖洗柱子 30min,防止無機(jī)鹽結(jié)晶堵塞色譜柱。
3、 在儀器操作過程中,要時(shí)刻注意柱壓的變化,防止柱壓過高,損害儀器。

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