一、簡要介紹

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin），又稱鬼筆鵝膏素，是從毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到的一種七氨基酸多肽毒素，以較高的親和力和特異性結(jié)合肌動(dòng)蛋白絲F-actin（聚合形式的肌動(dòng)蛋白）（Kd=20nM）。

鬼筆環(huán)肽將肌動(dòng)蛋白聚合的臨界濃度降至≤1μg/ml，從而用作一種聚合增強(qiáng)劑。

熒光探針標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽（Fluorescent-conjugated Phalloidins）能對(duì)組織培養(yǎng)細(xì)胞、組織切片和無細(xì)胞制備物進(jìn)行肌動(dòng)纖維絲染色。

經(jīng)鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的肌動(dòng)纖維絲仍能維持標(biāo)記前的許多功能特征包括能夠與肌球蛋白相互作用。

二、規(guī)格信息

【外觀】：紅色固體

【純度】：>95%

【分子量】：1775

【保存】：凍干粉4℃干燥保存半年；儲(chǔ)存液-20℃避光保存半年；

【重溶方法】：使用前簡單離心使得產(chǎn)品都降至管底，加入500µl 甲醇充分溶解后配置成14µM儲(chǔ)存液。建議按照10×50µl分裝，-20℃避光保存，穩(wěn)定保存6個(gè)月。

【生產(chǎn)廠商】：西安強(qiáng)化生物科技

三、使用說明

1. 免疫熒光（Immunofluorescence）

需要材料：

1）Actin-stainTM 555 Phalloidin（PHDH1）；

2）蓋玻片爬片生長達(dá)到半?yún)R合的Swiss 3T3細(xì)胞；

3）PBS buffer；

4）固定劑；

5）破膜劑；

6）抗熒光淬滅封片劑；

7）100nM DAPI in PBS；

8）載玻片；

9）蓋玻片封固液（透明指甲油）；

2. 制備穩(wěn)定的熒光標(biāo)記肌動(dòng)蛋白絲（Preparation of stabilized fluorescent actin filaments）

體外肌動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)（in vitro motility assays），穩(wěn)定的熒光標(biāo)記肌動(dòng)蛋白絲是研究肌球馬達(dá)蛋白的底物材料。Actin-stainTM 555 Phalloidin結(jié)合對(duì)肌球蛋白ATPase的肌動(dòng)蛋白激活無影響。

需要材料：

1）肌動(dòng)蛋白Actin protein；

2）通用肌動(dòng)蛋白緩沖液General Actin buffer；

3）10×聚合緩沖液Polymerization buffer；

4）Actin-stainTM 555 Phalloidin；

操作流程：

1) 用250ul 添加0.2mMATP和1.0mM DTT的通用肌動(dòng)蛋白緩沖液來重懸兔肌肉肌動(dòng)蛋白（rabbit muscle actin），使其濃度為1mg/ml。

2) 加入1/10體積的聚合緩沖液來聚合肌動(dòng)蛋白，室溫孵育1h。

3) 用含70nM Actin-stainTM 555 phalloidin的聚合緩沖液按照1:100的比例稀釋聚合的肌動(dòng)蛋白絲。

4) 吸取1ul標(biāo)記好的肌動(dòng)蛋白滴在已滴有一滴抗熒光淬滅劑的載玻片上。

5) 取一干凈蓋玻片蓋在液滴處，用紙巾吸掉多余液體。

6) 熒光顯微鏡觀察熒光纖維。肌動(dòng)蛋白絲平均長度為2-10um，在4℃避光能穩(wěn)定保存1周。

四、更多試劑

HumanLDL

HumanHDL

HumanOx-LDL

HumanAc-LDL

BODIPY 665/676

BODIPY 558/568 C12

Nigericin,Sodium Salt

Fluo-5N AM,Cell Permeant

Human High Density Lipoprotein

Human Dil-High Density Lipoprotein

CAY10731 (H2S Probe)硫化氫熒光探針

DL-Propargylglycine DL-炔丙基甘氨酸

Human Acetylated High Density Lipoprotein

Human VLDL (Human Very Low Density Lipoprotein)

原包裝應(yīng)盡量選擇避光，陰暗，干燥的地方進(jìn)行存放，同時(shí)此試劑僅用于科研實(shí)驗(yàn)。

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