Sepax ProAqa Excel親和色譜柱
概述
ProAqa Excel親和色譜柱適用于細(xì)胞系篩選或上游生物工藝優(yōu)化和質(zhì)量控制過程中快速準(zhǔn)確的單克隆抗體定量。填料是由平均粒徑20 µm、孔徑1000-2000 Å的均一的PS/DVB填料顆粒與重組蛋白A配體偶聯(lián)而成，該配體能與除IgG3以外的免疫球蛋白以及含F(xiàn)c的融合蛋白結(jié)合。填料具有機(jī)械強(qiáng)度，可以承受高流速和高壓操作。
技術(shù)參數(shù)
ProAqa Excel | 參數(shù) |
填料基質(zhì)(粒徑, 孔徑) | 均一的 PS/DVB(20 µm, 1000-2000 Å) |
固定配體 | 重組蛋白A |
色譜柱尺寸（內(nèi)徑×長度） | 2.1 mm x 30 mm |
色譜柱材質(zhì) | 不銹鋼 |
Z大壓力 | 200 bar |
pH 范圍 | 1.2-13.0 |
Z大流速 | 5 mL/min |
推薦流速 | 1-3 mL/min |
CIP | 0.1 M NaOH |
結(jié)合緩沖液 pH | 6.6-7.5 |
壽命 | >2000次進(jìn)樣 |
標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣量 | 10 µL |
IgG 檢測(cè)濃度 | 0.029-40 mg/mL* |
LOD | 0.29 µg |
均一的Sepax填料顆粒(20 µm) D90/D10<1.3
訂貨信息
| 規(guī)格 內(nèi)徑×長度 （mm×mm） | 材質(zhì) | 柱體積（mL） | 訂貨號(hào) |
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格 | |||
2.1×30 | 不銹鋼 | 0.1 | 271120980-2103S |
定制規(guī)格 | |||
2.1×50 | 不銹鋼 | 0.17 | 271120980-2105S |
4.6×35 | 不銹鋼 | 0.58 | 271120980-4603S |
4.6×50 | 不銹鋼 | 0.83 | 271120980-4605S |
4.6×100 | 不銹鋼 | 1.66 | 271120980-4610S |
填料特性
流速快達(dá) 3 mL/min
總循環(huán)（含平衡）時(shí)間可小于0.5 min
UV 280 nm: 0.029 - 7.50 mg/mL, LOD 0.294 µg
UV 300 nm: 0.117 - 40.0 mg/mL
空白對(duì)照
要使用高純度的緩沖液，緩沖液使用前需要排氣和過濾（0.22 μm）。進(jìn)樣前，請(qǐng)務(wù)必做空白對(duì)照，并仔細(xì)檢查峰積分結(jié)果中是否存在噪音或基線繪制不正確。為了降低結(jié)合緩沖液和洗脫緩沖液轉(zhuǎn)變時(shí)引起的基線波動(dòng)，建議使用：
（a）50 mM磷酸鹽（pH 7.0），0.15 M NaCl作為起始/沖洗溶液。
（b）100 mM磷酸鈉，0.15 M NaCl（pH 2.5）或100 mM，0.15 M NaCl（pH 2.5）作為洗脫緩沖液。
這些是對(duì)信號(hào)噪音有效的洗滌/洗脫液。鹽酸（HCl）能使抗體變性，所以洗脫產(chǎn)品如果需要生物活性的話，不建議添加HCl。
起始/沖洗溶液
（a）大多數(shù)情況下，可以使用簡(jiǎn)單的緩沖液，例如10-100 mM的磷酸鹽或Tris。
（b）結(jié)合/洗脫緩沖液的pH范圍為6.0-7.5，但是請(qǐng)注意，在較高的pH范圍下結(jié)合力強(qiáng)。
（c）添加一些鹽（0.1-0.2 M NaCl或KCl）抑制蛋白間相互作用的非特異性吸附。
洗脫條件
對(duì)于分析應(yīng)用，使用25-100 mM磷酸鹽（pH 2.0-3.5），含或不含高達(dá)150 mM的NaCl?？梢允褂玫钠渌疵摼彌_液成分包括磷酸鈉、鹽酸、、檸檬酸鹽、醋酸鹽以及其他含低pH成分的緩沖液。
由于抗體的結(jié)合/洗脫行為因種類和亞類而異，因此應(yīng)憑經(jīng)驗(yàn)確定洗脫條件。
樣品準(zhǔn)備和上樣
為了保證高效結(jié)合和避免柱子濾片堵塞，樣品一般按以下方式準(zhǔn)備：
（a）溶解或交換樣品到起始/洗滌緩沖液，這對(duì)于大份樣品（大于25%柱體積）尤其重要。
（b）進(jìn)樣前離心或用0.22 μm濾膜過濾樣品。
（c）熱處理血清樣品（56℃加熱30 min）去除殘留的纖維蛋白原，它們會(huì)在多次運(yùn)行中阻塞色譜柱。
（d）盡可能對(duì)樣品脫脂，因?yàn)橹|(zhì)會(huì)引起不可逆的結(jié)垢。
為保證高效結(jié)合及避免填料和色譜柱污染，需要確認(rèn)上樣量：
（a） 圖2和圖3顯示了ProAqa Excel色譜柱的動(dòng)態(tài)測(cè)試范圍。
（b） 其他抗體的結(jié)合能力取決于抗體來源和亞類。
（c） 需要優(yōu)化結(jié)合和洗脫條件并用樣品確認(rèn)，以確保達(dá)到結(jié)合平衡和洗脫。
（d） 在分析應(yīng)用中，Z小和Z大載量應(yīng)該通過標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性確定（如圖2所示，對(duì)于樣品濃度在0.029-7.500 mg/mL的常用定量分析，可以將檢測(cè)波長設(shè)置為280 nm。如圖3所示，如果樣品濃度較高（高達(dá)40 mg/mL），波長可設(shè)置為300 nm。在該分析應(yīng)用中，建議使用雙波長檢測(cè)（280 nm和300 nm）。
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