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Elisa:加顯A顯B回放

直播時(shí)間: 2025-08-28 15:14:273387
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以下是關(guān)于ELISA試劑盒中顯色液A和B液的詳細(xì)說(shuō)明:

一、主要成分與作用

顯色液A(過(guò)氧化氫溶液)?

主要成分為H?O?,作為受氫體參與HRP(辣根過(guò)氧化物酶)催化反應(yīng),生成活性氧中間體?。

顯色液B(TMB溶液)?

主要成分為四甲基聯(lián)苯胺(TMB),作為供氫體(DH?),與HRP催化產(chǎn)生的活性氧反應(yīng)生成藍(lán)色陽(yáng)離子自由基,終止后變?yōu)辄S色?。

二、反應(yīng)機(jī)制

HRP催化反應(yīng)?:

HRP + H?O? → HRP-活性氧復(fù)合物

HRP-活性氧復(fù)合物 + TMB → 藍(lán)色產(chǎn)物 + HRP

終止液(如硫酸)加入后,藍(lán)色產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為黃色?。

三、操作注意事項(xiàng)

添加順序?

需先加A液(H?O?)后加B液(TMB),以確保HRP充分催化H?O?生成活性氧,再與TMB反應(yīng)?。

穩(wěn)定性?

TMB顯色液需現(xiàn)配現(xiàn)用(2小時(shí)內(nèi)),避免氧化失效?。

操作時(shí)需戴手套,避免皮膚接觸(TMB為潛在致癌物)?。

四、其他底物對(duì)比

酶類型顯色液A顯色液B產(chǎn)物顏色

HRPH?O?TMB/OPD藍(lán)→黃

AP緩沖液PNP(對(duì)硝基苯磷酸酯)黃(405nm)

GOD葡萄糖對(duì)硝基藍(lán)四氮唑藍(lán)沉淀?

五、常見(jiàn)問(wèn)題

顯色異常?:若終止液含還原劑,可能導(dǎo)致藍(lán)色產(chǎn)物褪色?。

替代方案?:OPD可作為T(mén)MB的替代顯色劑,但毒性更高?。

注:以上資料僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),如需其他請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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