背景
滅螨醌是一種重要的合成殺螨劑農(nóng)藥，用來控制虱類、螨類和其他無脊椎動物的殺蟲劑，羥基滅螨醌是其代謝產(chǎn)物，具有高效、低毒、光譜和生物降解性等特性，在國內國外廣泛使用。歐盟、日本、加拿大及美國等國家地區(qū)對水果中滅螨醌殘留量都有嚴格的限量要求，最大殘留量(MRLs)為滅螨醌及其代謝物羥基滅螨醌的混合殘留總量。歐盟規(guī)定了蘋果和梨中為0.1mg/kg，橙子為0.4mg/kg；美國規(guī)定葡萄中為1.6mg/kg；我國的標準SN/T 4066-2014測定低限為0.005mg/kg。
本文參考SN/T 4066-2014《出口食品中滅螨醌和羥基滅螨醌殘留量的測定液相色譜-質譜/質譜法》，采用珀金埃爾默的QSight 220三重四極桿液質聯(lián)用系統(tǒng)建立了食品中滅螨醌和羥基滅螨醌的檢測方法，利用QSight獨特的雙離子源特色技術，該款儀器同時具有ESI和APCI雙離子源的配置，具有各自獨立的氣路和加熱系統(tǒng)，可見下圖。
無需手動更換離子源，只需在軟件中進行一鍵切換，即可滿足不同檢測模式的需求，簡單快速。同時前端配備的超高壓液相色譜，可以高效分離兩種化合物，并且靈敏度高，重復性好，完全滿足茶葉等食品中滅螨醌和羥基滅螨醌的限度檢測要求。
實驗方法
樣品處理：參考標準SN/T 4066-2014.
試樣準備：
取茶葉樣品約500g，經(jīng)食品粉碎機粉碎并通過2.0mm圓孔篩，混勻，裝入潔凈容器內密封，于0℃~4℃以下保存，備用。
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準確稱取2.5g(精確到0.01g)茶葉試樣于50mL離心管中，加入5mL水、0.02mL甲酸后，放置0.5h。加入15mL甲酸-乙腈溶液(0.5%甲酸)，用均質器在12000r/min高速勻漿1min，加入2g氯化鈉，旋渦混勻，并于7000r/min離心5min，吸取上層有機相于25mL容量瓶中。殘渣中加入10mL甲酸-乙腈溶液(0.5%甲酸)，重復提取一次，合并上層有機相并定容至25mL。轉移5mL有機相至試管中，在40℃條件下，氮吹濃縮至近干，待凈化。
凈化：
以2mL弗羅里硅土柱洗脫液【100mL正己烷-丙酮(體積比80+20)中加入0.5mL甲酸】分兩次洗滌以上試管中殘留物并全部轉入活化后的弗羅里硅土固相萃取柱中，用刻度試管收集，控制速度不超過1滴/s。待溶液全部流出后，加入10mL洗脫液洗脫，收集全部洗脫液，于40℃氮吹至近干。用乙腈溶解并定容至1mL，過0.22µm的有機濾膜后上機測定。
LC-MS/MS儀器方法
珀金埃爾默LX50 UHPLC參數(shù)
色譜柱：
Quasar C18，100*2.1mm，3um，貨號：N9308812；
流動相：
A：50%甲醇水(含0.5%甲酸)
B：乙腈(含0.5%甲酸)
柱溫：
40℃
流速：
0.5mL/min
進樣量：
10µL
表1.液相色譜梯度洗脫表
質譜參數(shù)
采用珀金埃爾默QSight 220三重四極桿液質聯(lián)用系統(tǒng)進行分析，離子源參數(shù)及目標化合物質譜參數(shù)見表2和表3。
表2.質譜離子源參數(shù)
表3.化合物的質譜參數(shù)列表
結果與討論
該方法一針進樣，快速測定滅螨醌和羥基滅螨醌兩種物質，可實現(xiàn)較好的分離及出色的峰形和靈敏度，MRM疊加譜圖如下圖2。兩化合物的峰型較好，并具有良好的靈敏度，每個色譜峰上有足夠的采集點數(shù)，可獲得準確的結果及優(yōu)異的重復性。
圖2.滅螨醌和羥基滅螨醌的MRM提取離子譜圖(5ng/ml)(點擊查看大圖)
采用流動相B稀釋標準溶液，分別稀釋成濃度為1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的標準溶液，根據(jù)待測化合物定量離子對峰面積的響應和對應的濃度制作標準曲線，如下圖3，在1ng/mL-100ng/mL的濃度范圍內，兩個化合物的線性均非常好，線性相關系數(shù)R2均在0.999以上。
圖3.滅螨醌和羥基滅螨醌的標準曲線譜圖(點擊查看大圖)
根據(jù)滅螨醌的結構特點，對比了稀釋溶劑為乙腈和含0.5%甲酸的乙腈溶液時的標準品響應情況譜圖及峰面積結果，見下圖4和表4，故采用兩種稀釋劑均可，無需加入甲酸。
圖4.不同稀釋劑的色譜圖情況(100ng/mL)(點擊查看大圖)
表4.不同稀釋劑下的峰面積結果
同時考察了該方法的儀器檢出限情況，在0.5ng/mL的濃度下，羥基滅螨醌和滅螨醌的的信噪比分別為11和12，如下圖所示，可見該方法靈敏度較高，完全滿足該標準的檢出要求。
圖5.0.5ng/mL濃度下的滅螨醌和羥基滅螨醌提取離子譜圖及信噪比結果(點擊查看大圖)
結論
01 本文采用LX50 UPLC-QSight 220三重四極桿液質聯(lián)用系統(tǒng)建立了快速、高靈敏度且可靠的LC-MS/MS實驗方法來測定食品中滅螨醌和羥基滅螨醌兩種化合物，為食品中該類化合物提供了可靠的高通量檢測手段，且檢出限完全滿足相應標準的要求。
02 同時，珀金埃爾默的QSight 220液質聯(lián)用系統(tǒng)具有創(chuàng)新的獨家雙離子源設計和獨特的主動排廢氣設計、專利的HSID質譜接口以及反吹氣設計，儀器自身能夠確保處于潔凈狀態(tài)，具有強大的抗污染能力，從而獲得高靈敏度，重現(xiàn)性好的實驗數(shù)據(jù)，尤其適合該類前處理簡單，無凈化過程的樣品分析，保證靈敏度的同時，無需日常維護，大大降低使用成本，同時無需手動頻繁更換離子源，提高效率的同時減少對實驗技術人員的要求。
參考文獻
[1]. SN/T 4066-2014出口食品中滅螨醌和羥基滅螨醌殘留量的測定液相色譜-質譜/質譜法
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