【??參數(shù)信息】

英文名稱：C58C1 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

中文名稱：C58C1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。

檢測轉(zhuǎn)化效率：>105 cfu/μg DNA。

規(guī)格：10×50μl，50×50μl

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡單概述】

C58C1 是一種發(fā)根農(nóng)桿菌（Agrobacterium rhizogenes）菌株，基因型為C58 染色體背景，并攜帶pRiA4b 農(nóng)桿堿型 Ri 質(zhì)粒。

該菌株具有strR和rifR雙抗性，對羧芐青霉su等敏感 。

C58C1農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，適合大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

基因型為Agrobacterium rhizogenes (strR,rifR) pRiA4b (agropine type)，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。

【操作步驟】

（一）電擊杯預(yù)處理

從75%乙醇中取出電擊杯，倒置瀝干5分鐘 → 正置5分鐘使乙醇揮發(fā) → 插入碎冰預(yù)冷5分鐘（壓實(shí)冰面，杯頂離冰面0.5cm）

（二）感受態(tài)細(xì)胞與質(zhì)粒混合

取-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞，冰浴5分鐘至融化

加入 0.01~1 μg質(zhì)粒DNA（體積≤6μl，不超過細(xì)胞體積的1/10）

輕柔混勻：手指輕彈管底或槍頭吹打（避免渦旋或劇烈震蕩）

（三）電轉(zhuǎn)化

將混合液轉(zhuǎn)入預(yù)冷的電擊杯，避免氣泡 → 蓋緊杯蓋

設(shè)置電轉(zhuǎn)參數(shù)：

電壓：2400 V

電容：25 μF

電阻：200 Ω

啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，電擊后 迅速將電擊杯放回冰中 冷卻1分鐘

（四）復(fù)蘇培養(yǎng)

向電擊杯中加入700 μl無抗生素LB培養(yǎng)基 → 吸回混合液至原EP管

28℃、150-200 rpm振蕩培養(yǎng) 2-3小時(shí)。

（五）涂板篩選

6000 rpm離心1分鐘 → 棄上清，保留約100 μl液體。

重懸菌體，涂布于含抗生素的平板。

【相關(guān)試劑】

FITC-Con A FITC

Auramine O金胺O

Kanamycin Sulfate

cis-Zeatin 順式玉米素

Trans-Zeatin 反玉米素

Allophycocyanin (APC) 別藻藍(lán)蛋白

Trans-Zeatin Riboside 反玉米素核苷

Picro Sirius Red Stain 天狼星紅染色液

BJ5183-AD-1 Electrocompetent cell

Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit

Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請知悉。