標(biāo)題：NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

【??參數(shù)信息】

英文名稱：NovaBlue(DE3) Chemically Competent Cell

中文名稱：NovaBlue(DE3)大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

規(guī)格：10×50μl，50×50μl

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡(jiǎn)單概述】

菌株描述

NovaBlue(DE3)菌株來(lái)源于K12菌株，具有較高的轉(zhuǎn)化效率，能同時(shí)用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建以及蛋白的原核表達(dá)。

NovaBlue(DE3)菌株具四環(huán)素抗性，recA和endA的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純質(zhì)粒DNA的提取。

lacZΔM15的存在使其能用于藍(lán)白斑篩選。

NovaBlue(DE3)菌株含DE3區(qū)，說(shuō)明其染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體，適用于靶基因克隆進(jìn)入T7啟動(dòng)子表達(dá)載體比如pET系列的蛋白表達(dá)。

描述

NovaBlue(DE3)大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是大腸桿菌NovaBlue(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。

經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×109 cfu/μg DNA。

且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

【作用機(jī)制】

1. DNA轉(zhuǎn)化機(jī)制（化學(xué)感受態(tài)）

原理：通過(guò)化學(xué)試劑處理細(xì)胞，使其細(xì)胞膜通透性增加，允許外源DNA進(jìn)入。

操作步驟：

冰浴融化感受態(tài)細(xì)胞，加入目標(biāo)DNA（體積≤1/10細(xì)胞懸液）。

冰浴30分鐘：促進(jìn)DNA吸附于細(xì)胞表面。

42℃熱激45-90秒：短暫升溫形成膜通道，使DNA進(jìn)入細(xì)胞。

冰浴2-3分鐘：封閉膜通道。

加入復(fù)蘇培養(yǎng)基（如LB/SOC） ：37℃振蕩培養(yǎng)45-60分鐘，使抗性基因表達(dá)。

涂布含抗生素平板：篩選轉(zhuǎn)化子。

2. 蛋白表達(dá)機(jī)制（依賴DE3區(qū)）

T7 RNA聚合酶表達(dá)：

DE3區(qū)整合的 lacUV5 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng) T7 RNA聚合酶組成型表達(dá)。

當(dāng)目標(biāo)基因克隆至 T7啟動(dòng)子載體（如pET、pGEX、pMAL系列）時(shí)，T7 RNA聚合酶可特異性激活其轉(zhuǎn)錄。

誘導(dǎo)表達(dá)：

添加 IPTG（0.1-2 mM）解除 lacIq 阻遏蛋白對(duì) lacUV5 的抑制，誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶及目標(biāo)蛋白表達(dá)。

需優(yōu)化IPTG濃度、溫度（通常37℃）和時(shí)間（通常3-6小時(shí)）。

3. 克隆篩選機(jī)制

藍(lán)白斑篩選：

lacZΔM15 突變導(dǎo)致β-半乳糖苷酶失活，但與載體（如pUC系列）的α肽互補(bǔ)后可恢復(fù)活性。

在含 X-gal 和 IPTG 的平板上，含空載體的菌落呈藍(lán)色，重組質(zhì)粒（插入片段破壞α肽）菌落呈白色。

抗生素篩選：四環(huán)素抗性用于轉(zhuǎn)化子初篩。

【應(yīng)用領(lǐng)域】

（1）質(zhì)粒構(gòu)建與克隆

高轉(zhuǎn)化效率適合連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化、質(zhì)粒擴(kuò)增及文庫(kù)構(gòu)建。

支持藍(lán)白斑篩選（需使用含lacZα的載體，如pUC系列）。

（2）蛋白原核表達(dá)

核心應(yīng)用：專為T(mén)7啟動(dòng)子載體設(shè)計(jì)（如pET、pGEX、pMAL系列），可誘導(dǎo)表達(dá)目標(biāo)蛋白。

需配合IPTG誘導(dǎo)（濃度0.1–2 mM），并優(yōu)化溫度/時(shí)間參數(shù)。

（3）特殊場(chǎng)景適配性

適用于需要高純度質(zhì)粒的實(shí)驗(yàn)（如測(cè)序、轉(zhuǎn)染）。

【相關(guān)試劑】

Cy3 生物su偶聯(lián)物

iFluor 680 Phalloidin

iFluor647 Phalloidin

iFluor594 Phalloidin

SYTO 9 (20× in DMSO) PCR

Decylubiquinone (mPTP inhibitor)

Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell

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本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。