【??參數(shù)信息】
英文名稱：OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell
中文名稱：OverExpress C43(DE3)大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，OverExpress C43(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格：50×100μl，10x100ul
運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸。
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
OverExpress C43(DE3)是一種經(jīng)過基因工程改造的大腸桿菌（E. coli）菌株，專為高效表達(dá)毒性蛋白或疏水性蛋白而設(shè)計(jì)。
OverExpress C43(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，其核心特點(diǎn)包括：
起源與基因型：
源自BL21(DE3)菌株，通過篩選獲得至少兩個(gè)未知突變，這些突變使其能耐受并高效表達(dá)對(duì)普通大腸桿菌有毒的蛋白質(zhì)。
基因型為： F? ompT hsdSB (rB? mB?) gal dcm (DE3)。
功能定位：
用于表達(dá)真核/原核生物中的毒性蛋白（如膜蛋白、疏水性蛋白）及病毒、哺乳動(dòng)物等來源的重組蛋白。
兼容pET、pGEX、pMAL等T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的表達(dá)載體。
【使用方法】
一、細(xì)胞解凍與DNA混合
解凍感受態(tài)細(xì)胞：將C43(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80°C冰箱取出，置于冰上緩慢解凍（約5-10分鐘）。
加入質(zhì)粒DNA：取50μL解凍細(xì)胞，加入1-5μL重組質(zhì)粒DNA（推薦質(zhì)粒濃度≤10 ng/μL），輕柔混勻后冰浴30分鐘。
二、熱激轉(zhuǎn)化
熱激處理：將混合液置于42°C水浴中精確熱激45秒，迅速放回冰浴2分鐘。
復(fù)蘇培養(yǎng)：加入450μL預(yù)熱的SOC或LB培養(yǎng)基，37°C、200 rpm振蕩培養(yǎng)60分鐘以恢復(fù)細(xì)胞活性。
三、涂板篩選
涂布抗生素平板：取100-200μL復(fù)蘇菌液涂布于含對(duì)應(yīng)抗生素的LB瓊脂平板。
培養(yǎng)：37°C倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)，直至單菌落出現(xiàn)。
四、蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
接種與培養(yǎng)：挑取單菌落接種至含抗生素的LB培養(yǎng)基，37°C振蕩培養(yǎng)至OD600≈0.6（對(duì)數(shù)中期）。
誘導(dǎo)條件：
誘導(dǎo)劑：加入IPTG（終濃度0.1-1 mM）。
溫度與時(shí)間：通常降低溫度至25-30°C，誘導(dǎo)4-16小時(shí)。
五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
菌株特性：
C43(DE3)衍生自BL21(DE3)，通過突變篩選獲得對(duì)膜蛋白毒性的高耐受性，尤其適合表達(dá)膜蛋白。
其轉(zhuǎn)錄組上調(diào)了膜蛋白生物合成相關(guān)基因，促進(jìn)正確折疊與膜整合。
質(zhì)粒選擇：避免使用含lacI的誘導(dǎo)型載體，以免抑制菌株的表達(dá)調(diào)控優(yōu)勢(shì)。
替代方案：若需更精細(xì)調(diào)控表達(dá)，可考慮Lemo21(DE3)菌株。
【相關(guān)試劑】
mFluor Red 780 酸
mFluor Violet 510 酸
mFluor Blue 585琥珀酰亞胺酯
iFluor 680 amine iFluor 680 胺
iFluor 680 hydrazide iFluor 680酰肼
Pan-caspase Inhibitor Z-VAD-FMK
Z-YVAD-FMK (Caspase-1 inhibitor)
Z-DEVD-FMK (Caspase-3 inhibitor)
CCCP (50 mM)凋亡誘導(dǎo)劑/質(zhì)子載體
Ac-DEVD-CHO (Caspase-3/7 inhibitor)
SYBR Green I Nucleic Acid Stain (PCR Grade, 10,000×)
EPI400 Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
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