【??參數(shù)信息】
英文名稱(chēng)：K599 Electrocompetent Cell
中文名稱(chēng)：K599農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格：10ul,10x50ul
運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
K599農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是一種發(fā)根農(nóng)桿菌（Agrobacterium rhizogenes） 的基因工程工具，具有以下核心特征：
菌株特性：
攜帶 pRi2659農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒（agropine type Ri plasmid），賦予其strR。
屬于革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，可感染多種植物（如雙子葉植物、單子葉植物及裸子植物），宿主范圍廣泛（葫蘆科、豆科、茄科等）。
從黃瓜中分離，常用于植物毛狀根轉(zhuǎn)化研究。
設(shè)計(jì)：
經(jīng)特殊工藝制備，用于大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化優(yōu)化，轉(zhuǎn)化效率高。
配套提供對(duì)照質(zhì)粒。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
材料與試劑
K599電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞（-80℃保存，避免反復(fù)凍融）
純化質(zhì)粒DNA（建議試劑盒抽提，雙蒸水溶解）
預(yù)冷的0.1 cm電擊杯（Gene Pulser®規(guī)格）
無(wú)抗生素的YEB/LB液體培養(yǎng)基
含相應(yīng)抗生素的YEB/LB固體平板
冰浴設(shè)備、電轉(zhuǎn)儀（如Bio-rad）
電擊杯預(yù)處理
從75%乙醇儲(chǔ)存液中取出電擊杯，倒置瀝干5分鐘，再正置5分鐘使乙醇揮發(fā)干凈
立即插入碎冰中預(yù)冷5分鐘，壓實(shí)冰面，杯頂離冰面0.5 cm以便蓋蓋
二、操作步驟
感受態(tài)細(xì)胞與質(zhì)?；旌?/span>
取-80℃保存的K599感受態(tài)細(xì)胞，手心輕握部分融化后插入冰浴5分鐘
每50μl感受態(tài)細(xì)胞加入0.1-1μg質(zhì)粒DNA（體積≤感受態(tài)體積的1/10，即≤5μl）
用槍頭輕輕吹打混勻（避免氣泡），冰浴靜置1分鐘
電擊轉(zhuǎn)化
將混合液快速轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的電擊杯中，蓋緊杯蓋
設(shè)置電轉(zhuǎn)儀參數(shù)（以下為常用參數(shù)，可選其一）：
Bio-rad推薦：電壓2400-2500V，電容25μF，電阻200Ω
或參考儀器自帶農(nóng)桿菌Protocol
啟動(dòng)電擊，完成后迅速將電擊杯插入冰中冷卻
復(fù)蘇培養(yǎng)
向電擊杯中加入700-900μl無(wú)抗生素的YEB/LB培養(yǎng)基
用槍吹吸混勻，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管中
28℃、150-200 rpm振蕩培養(yǎng)2-3小時(shí)
涂布與培養(yǎng)
6000 rpm離心1分鐘，棄上清（保留約100μl液體）
輕柔吹打重懸菌體，涂布于含抗生素的YEB/LB平板
28℃倒置培養(yǎng)2-3天，觀察單菌落。
【相關(guān)試劑】
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