【??參數(shù)信息】
英文名稱：OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell
中文名稱：OverExpress C43大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格：10×100μl，50×100μl
運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
菌株描述
OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大腸桿菌菌株，有效表達(dá)不同物種有機(jī)生物體包括細(xì)菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳動(dòng)物來(lái)源的毒性蛋白。
OverExpress菌株含賦予毒性蛋白抗性的遺傳突變。C41(DE3)菌株來(lái)源于BL21(DE3)，此菌株含一個(gè)突變，能降低T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的水平，從而預(yù)防許多重組毒性蛋白過(guò)表達(dá)引起的細(xì)胞死亡。
C43(DE3)菌株來(lái)源于C41(DE3)，通過(guò)篩選對(duì)另一個(gè)不同毒性蛋白的抗性菌株而獲得。C43(DE3)與C41(DE3)菌株相比，至少攜帶另一個(gè)不同突變，使其獲得廣泛的毒性蛋白耐受能力。
正如BL21(DE3)菌株，OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都含DE3區(qū)，所有菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體，適用于靶基因克隆進(jìn)入T7啟動(dòng)子表達(dá)載體比如pET系列的蛋白生產(chǎn)。
OverExpress C41(DE3) pLysS和C43(DE3) pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，具有抗性，能夠表達(dá)少量T7。
T7溶菌mei能作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不會(huì)干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)，從而能夠穩(wěn)定重組表達(dá)的蛋白，特別是毒性蛋白。
需加入菌株培養(yǎng)基內(nèi)以維持pLysS質(zhì)粒。
基因型：F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLysS (CmR)
OverExpress C43大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。
經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×108 cfu/μg DNA。
且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
【使用方法】
（1）準(zhǔn)備工作：從-80℃冰箱取出感受態(tài)細(xì)胞，迅速置于冰浴中融化（約5分鐘）。操作時(shí)需穿實(shí)驗(yàn)服、戴手套。
（2）加入DNA：待菌塊融化后，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物），輕彈管底混勻（避免用槍吸打）。注意：DNA體積不超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。
（3）冰浴孵育：冰浴靜置25分鐘。
（4）熱激處理：42℃水浴熱激45秒或30秒，立即轉(zhuǎn)移至冰浴靜置2分鐘。此過(guò)程勿搖動(dòng)離心管。
（5）復(fù)蘇培養(yǎng)：加入預(yù)熱至室溫的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃搖床培養(yǎng)45-60分鐘。
（6）涂板篩選：取適量菌液涂布于含34μg/ml氯霉su（防質(zhì)粒丟失）和對(duì)應(yīng)抗生素的瓊脂板。高濃度質(zhì)粒需減少涂板菌量。
（7）誘導(dǎo)表達(dá)：若需蛋白表達(dá)，挑取單克隆至含抗生素的LB培養(yǎng)基，培養(yǎng)至OD600=0.6-0.8后，用0.1~2mM IPTG誘導(dǎo)。需優(yōu)化誘導(dǎo)時(shí)間、溫度及IPTG濃度。
【相關(guān)試劑】
MPP+ iodide
Tide Quencher 1胺
Tide Quencher 3胺
SDS Lysis Buffer SDS裂解液
RIPA Lysis Buffer (Strong)RIPA
RIPA Lysis Buffer(Medium)RIPA
RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液(弱)
Rosetta (DE3)Competent Cell大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell
OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell
TB1 Chemically Competent Cell大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
Tuner(DE3) Chemically Competent Cell大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta-gami 2(DE3) Chemically Competent Cell大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞
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