【??參數(shù)信息】
英文名稱：ATCC15834 Electrocompetent Cell
中文名稱：ATCC15834農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
規(guī)格：10×50μl，50×50μl
純度：≥95%
儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥
生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
ATCC15834農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是一種發(fā)根農(nóng)桿菌菌株，其核心特征包括：
基因型：攜帶天然 pRi15834 農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，賦予其特定的植物轉(zhuǎn)化能力。
宿主范圍：適用于多種植物（雙子葉植物和部分單子葉植物），專長(zhǎng)于誘導(dǎo)藥用植物的毛狀根。
制備工藝：經(jīng)特殊工藝優(yōu)化，適合大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（如基因組文庫(kù)），轉(zhuǎn)化效率高。
【使用方法】
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
安全防護(hù)：穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
電擊杯處理：
將0.1 cm電擊杯和杯蓋從75%乙醇儲(chǔ)存液中取出，倒置于干凈吸水紙上5分鐘瀝干水分，再正置5分鐘使乙醇充分揮發(fā)。
立即插入碎冰中壓實(shí)，杯頂離冰面0.5 cm以便蓋蓋，冰浴5分鐘充分降溫。
感受態(tài)細(xì)胞解凍：取-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5分鐘，待融化。
二、質(zhì)粒與感受態(tài)細(xì)胞混合
質(zhì)粒要求：
質(zhì)粒DNA需用試劑盒抽提，雙蒸水溶解。
用量建議：使用需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，推薦0.01-1 μg質(zhì)粒DNA/100 μl感受態(tài)細(xì)胞。
混合操作：
將質(zhì)粒加入解凍的感受態(tài)細(xì)胞中，用移液槍輕輕吹打混勻（避免氣泡）。
冰上靜置5分鐘。
三、電轉(zhuǎn)操作
電擊參數(shù)設(shè)置：
電容（C）= 25 μF，電阻（PC）= 200 ohm，電壓（V）= 2400 V（Bio-rad電轉(zhuǎn)儀參考參數(shù)）。
電擊步驟：
將混合液快速轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的電擊杯中，蓋緊杯蓋。
吸干電擊杯外壁水分，放入電轉(zhuǎn)槽。
啟動(dòng)電擊，完成后立即將電擊杯插回冰中冷卻2分鐘。
四、復(fù)蘇與培養(yǎng)
復(fù)蘇培養(yǎng)：
向電擊杯中加入700 μl 無(wú)抗生素的TY液體培養(yǎng)基。
用移液槍吸出混合液，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管。
28℃、200 rpm振蕩培養(yǎng)2-3小時(shí)。
涂板與培養(yǎng)：
6000 rpm離心1分鐘，棄上清（留約100 μl）。
輕輕吹打重懸菌體，涂布于含 Kan（50 μg/ml） 的TY平板上。
28℃倒置培養(yǎng)48-72小時(shí)。
【相關(guān)試劑】
Cy3 生物su偶聯(lián)物
MPP+ iodide
Tide Quencher 1胺
Tide Quencher 3胺
Tide Quencher 7WS
BL21(DE3)Competent Cell
(1S,3R)-RSL3 (GPx4 inhibitor)
BCP-T.A. (Ferroptosis inducer)鐵死亡誘導(dǎo)劑
Decylubiquinone (mPTP inhibitor) 癸基泛醌
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DH10B Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
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Ar 1193 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
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